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生理生化指标

脯氨酸(茚三酮法)

       当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后,茚三酮与脯氨酸发生反应,溶液变为红色,再用甲苯处理,则色素全部转移至甲苯中,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在 λ 520 nm波长下测定吸光度,即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。

可溶性糖(蒽酮法)

       糖(sugar)在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定。该法几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在 λ 620 nm处有最大吸收峰,故在此波长下进行比色。

可溶性蛋白(考马斯亮蓝法)

       考马斯亮蓝G-250法(Coomassie brilliant blue,G-250)是一种利用蛋白质-染料结合的原理,定量测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式,红色和青色。该染料在游离状态下为红色,在酸性溶液中可与蛋白质的疏水区结合,颜色由红色转变成青色,其最大光吸收由 λ 465 nm变成 λ 595 nm。在一定蛋白质浓度范围内(1-1000μg),蛋白质-染料复合物在 λ 595 nm下的吸光度与蛋白质含量成正比。蛋白质和染料结合是一个很快的过程,约2 min即可反应完全,呈现最大光吸收,并可稳定1 h,之后蛋白质-染料复合物发生聚合并沉淀出来。

超氧物歧化酶SOD(NBT法)

       超氧物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)普遍存在于动、植物体内,是一种清除超氧阴离子自由基(O2·-)的酶。本项目依据SOD抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2·-,可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙,后者在560nm处有最大吸收。而 SOD可清除O2·-,从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深,说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。

过氧化物酶(愈创木酚法)

       在过氧化物酶(peroxidase,POD)催化下,双氧水(H2O2)将愈创木酚氧化成茶褐色产物,此产物在 λ 470 nm处有最大吸收峰,故可以通过测其吸光度的变化测定过氧化物酶的活性。

过氧化氢酶CAT(紫外法)

       过氧化氢酶(catalase,CAT)是一种广泛存在于生物组织中的氧化还原酶,它能催化过氧化氢(H2O2)分解为水和氧气,清除组织中的过氧化氢。H2O2在 λ 240 nm处有一个吸收高峰,其吸光度与H2O2的含量成正比,过氧化氢酶能分解H2O2,使反应溶液吸光度A240随反应时间而降低。单位时间内吸收的差值就是过氧化氢酶的活性。

 

 

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